Alat Rapid Antigen: Pengetahuan Dasar Deteksi Asam Nukleat - Bagian 1

Alat Antigen Rapid: Pengetahuan dasar tentang deteksi asam nukleat

1. Apa itu deteksi asam nukleat

Definisi asam nukleat: asam nukleat adalah sejenis makromolekul biologis yang dihubungkan oleh nukleotida atau deoxynucleotides melalui 3 ', 5' - Fosphate Diester Bond.

Asam nukleat memiliki fungsi biologis yang sangat penting, terutama menyimpan dan mentransmisikan informasi genetik.

2. Klasifikasi asam nukleat

Makromolekul asam nukleat dapat dibagi menjadi dua kategori: asam deoksiribonukleat (DNA) dan asam ribonukleat (RNA).

3. Komposisi asam nukleat

DNA dan RNA terbentuk dengan menghubungkan kepala dan ekor nukleotida, yang terdiri dari lima elemen: C, H, O, N dan P.DNA adalah bahan genetik dari sebagian besar organisme. RNA adalah bahan genetik dari beberapa virus bebas DNA, seperti HIV, influenza, virus SARS, dll. Panjang rata-rata RNA adalah sekitar 2000 nukleotida, sedangkan DNA manusia sangat panjang, sekitar 3x10 ^ 9 nukleotida.

4. Fungsi asam nukleat

Ini berperan dalam menyimpan dan mentransmisikan informasi genetik dalam replikasi protein dan sintesis. Asam nukleat tidak hanya bahan genetik dasar, tetapi juga memainkan peran penting dalam biosintesis protein. Oleh karena itu, ia memainkan peran yang menentukan dalam serangkaian fenomena kehidupan penting seperti pertumbuhan, faktor keturunan, dan variasi.

DNA dan RNA adalah asam nukleat. Apa perbedaan dalam komposisi kimia mereka sebagai berikut:

5. Tes Metode

Metode deteksi asam nukleat terutama mendeteksi asam nukleat target dalam sampel dengan secara bersamaan memperkuat asam nukleat target dan menghasilkan sinyal yang terdeteksi. Ini dapat diterapkan pada deteksi asam nukleat dalam mikrobiologi klinis, skrining darah, kedokteran forensik dan pencegahan bidang lain.

Saat ini, metode utama yang digunakan adalah sebagai berikut:

Sebuah. Amplifikasi bergantung urutan asam nukleat

NASBA adalah teknik baru untuk amplifikasi isotermal RNA yang dimediasi oleh sepasang primer, yang terus menerus dan seragam dan urutan nukleotida tertentu dalam vitro. Reaksi dilakukan pada 42 ℃, dan templat RNA dapat diperkuat sekitar 109 kali dalam 2 jam RNA dianil untuk mensintesis CDNA di bawah aksi AMV Reverse Transcriptase untuk membentuk RNA: DNA hybrid, maka rnaseh menurunkan RNA, Primer II dan CDNA ditutup untuk mensintesis untaian komplementer DNA kedua di bawah aksi T7RNA terbalik. Di bawah Tindakan T7RNA Polimerase, DNA terdampar ganda dapat dimulai dengan urutan promotornya untuk menyalin RNA. RNA dapat ditranskripsi secara terbalik ke dalam DNA di bawah aksi transkripsion balik, masukkan fase sirkulasi dan memperkuat sejumlah besar templat.

B. Amplifikasi yang dimediasi transkripsi

Prinsip teknis TMA pada dasarnya sama dengan NASBA. Sedikit perbedaannya adalah bahwa TMA menggunakan mmlv reverse transcriptase dan t7rna polimerase. MMLV Reverse Transcriptase memiliki aktivitas transkriptase terbalik dan aktivitas H rnase. Reaksi dilakukan pada 41,5 ℃, dan templat RNA dapat diperkuat sekitar 109 kali dalam 1 jam.

C. Reaksi Rantai Catalyzed Ligase (LCR)

LCR adalah teknologi amplifikasi probe berdasarkan interkoneksi target molekul yang bergantung pada probe oligonukleotida. Ini adalah teknologi amplifikasi in vitro yang menjanjikan yang dikembangkan setelah prinsip PCR Ketika dua segmen probe DNA memudar dengan templat tanpa mutasi, jika dua probe berdekatan dan tidak ada interval nukleotida di tengah, mereka dapat dihubungkan di bawah aksi ligase, dan rantai baru setelah koneksi dapat digunakan sebagai Template untuk memandu koneksi pada siklus berikutnya untuk menghasilkan sub rantai baru. Jika mutasi dasar nukleotida terjadi di bagian penghubung, reaksi penghubung tidak dapat terjadi dan reaksi amplifikasi dihentikan.

D. Uji Reaksi Rantai Polimerase (PCR)

Prinsip dasar teknologi PCR mirip dengan proses replikasi alami DNA, dan spesifisitasnya tergantung pada primer oligonukleotida pelengkap untuk kedua ujung urutan target.pcr terdiri dari tiga langkah reaksi dasar: ekstensi denaturasi.

① denaturasi template DNA: Setelah DNA templat dipanaskan sekitar 93 ℃ untuk waktu tertentu, untaian ganda template DNA atau Double Strand DNA yang dibentuk oleh amplifikasi PCR disarikan untuk membentuk satu untai, sehingga dapat digabungkan dengan primer untuk mempersiapkan putaran reaksi berikutnya.

② Annealing (Refolding) dari Template DNA dan primer: Setelah DNA templat dipanaskan dan didenaturasi ke dalam satu untai, suhu turun menjadi sekitar 55 ℃, dan primer dipasangkan dengan urutan komplementer dari satu untai DNA template.

③ ekstensi primer: di bawah aksi taqdna polimerase, konjugat primer template DNT menggunakan bahan baku reaksi dan urutan target sebagai templat untuk mensintesis rantai replikasi semi semi baru saling melengkapi dengan rantai DNA template sesuai dengan prinsip pasangan pangkalan dan semi replikasi. Ulangi tiga proses ekstensi dinaturasi cyclic untuk mendapatkan lebih banyak \"Rantai replikasi semi semi \", dan rantai baru ini dapat menjadi template untuk siklus berikutnya. Dibutuhkan 2-4 menit dan 2-3 jam untuk memperkuat gen target Untuk diperluas jutaan kali. Untuk mendeteksi HIV RNA, kita perlu mentranskripsi RNA menjadi CDNA dengan reaksi transkripsi terbalik, dan kemudian amplifikasi PCR dengan CDNA sebagai template. Reaksi ini disebut RT-PCR.